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瓊脂糖核酸電泳實(shí)驗(yàn)操作流程

瓊脂糖核酸電泳實(shí)驗(yàn)操作流程

1.用蒸餾水將制膠模具和梳子沖洗干凈,放在制膠平板上,封閉模具邊緣,架好梳子;

2.根據(jù)欲分離DNA大小用凝膠緩沖液配制適宜濃度的瓊脂糖凝膠:準(zhǔn)確稱量瓊脂糖干粉,加入到配膠用的三角燒瓶?jī)?nèi),定量加入電泳緩沖液(一般20~30 ml);

3.放入到微波爐內(nèi)加熱熔化。冷卻片刻,加入一滴熒光染料,輕輕旋轉(zhuǎn)以充分混勻凝膠溶液,倒入電泳槽中,待其凝固;

4.室溫下30~45分鐘后凝膠*凝結(jié),小心拔出梳子,將凝膠安放在電泳槽內(nèi);

5.向電泳槽中倒入電泳緩沖液,其量以沒過膠面1mm為宜,如樣品孔內(nèi)有氣泡,應(yīng)設(shè)法除去;

6.在DNA樣品中加入10×體積的載樣緩沖液(loading buffer),混勻后,用槍將樣品混合液緩慢加入被浸沒的凝膠加樣孔內(nèi);

7.接通電源,紅色為正極,黑色為負(fù)極,切記DNA樣品由負(fù)極往正極泳動(dòng) (靠近加樣孔的一端為負(fù))。一般60~100V電壓,電泳20~40min即可;

8. 根據(jù)指示劑泳動(dòng)的位置,判斷是否終止電泳;

9.電泳完畢,關(guān)上電源,在凝膠成像儀上觀察電泳帶及其位置,并與核酸分子量標(biāo)準(zhǔn)Marker比較被擴(kuò)增產(chǎn)物的大小。 

瓊脂糖凝膠濃度與線形DNA的分辨范圍

瓊脂糖凝膠濃度線形DNA的分辨范圍(bp)

0.5%1,000~30,000

0.7%800~12,000

1.0%500~10,000

1.2%400~7,000

1.5%200~3,000

2.0%50~2,000


TEL:13798128437

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